Наверное, уже все слышали о дисбактериозе. О нем говорят по телевизору, по радио, можно прочитать в газетах и интернете. Люди считают, что проблемы со здоровьем связаны именно с дисбактериозом. А так ли это? Если мы считаем нормофлорой (нормальной микрофлорой кишечника) оптимальный для нашего здоровья количественный и качественный состав микроорганизмов. То дисбактериозом можно считать изменения качественного, количественного состава микрофлоры кишечника. Говоря о дисбактериозе, многие не знают, что это даже не болезнь. Это всегда следствие. Это всего лишь термин, который характеризует состояние микрофлоры. Если лечить дисбактериоз, но не лечить причину, которая его вызвала, то вряд ли вы сможете добиться успеха. Чтобы восстановить микрофлору врач будет опираться на диагноз, микроорганизмы кишечника способны регенерироваться, порой для их восстановления будет достаточно продуктов питания. Иногда же без медикаментозных средств не обойтись. Врач назначает препараты, содержащие живых полезных бактерий. Например, Нормобакт. Это живые полезные (лактобактерии, бифидобактерии) микроорганизмы и питательная среда. Где бактерии растут, развиваются, размножаются.
Бывают случаи, когда дисбактериоз протекает бессимптомно, тогда диагностировать данное состояние могут только дополнительные методы исследования. Один из них – ПЦР.
Что же такое ПЦР? Эту аббревиатурару расшифровывают, как полимеразная цепная реакция. Принцип метода расшифровал в 1983 году Кэрри Мюллис. В основе данного метода лежит многократное копирование определенного участка ДНК, при помощи ДНК-полимеразы. Это происходит по принципу комплементарности, он является маркерным для определенного вида возбудителя. Простыми словами, при помощи ПЦР можно очень быстро размножить участочек РНК или ДНК. Для чего это необходимо? Например, ели в исследуемом материале есть бактерии, вирусы в небольшом количестве, то определить их наличие традиционными методами очень сложно. При помощи ПЦР происходит клонирование участочка ДНК того организма, который необходимо найти. И он становится видимым. Данная реакция специфична на все 100 процентов.
ПЦР включает в себя несколько стадий:
- Денатурация ДНК. Двухцепочную матрицу ДНК нагревают до 98 градусов от 30 секунд до 2-х минут. Это делают для того, чтобы цепи разошлись. Данная стадия называется денатурацией, так как разрушаются водородные связи между цепями ДНК. Перед этим циклом проводится нагрев реакционной смеси от 2-5 минут, для полного разрушения водородных связей.
- Образование двухцепочечных участков ДНК (отжиг). Когда цепи разошлись, то температуру понижают, для того, чтобы праймеры смогли связаться с одноцепочечной матрицей. Данная стадия называется отжигом. Температура отжига зависит только от состава праймеров и выбирается равной температуре их плавления. Неправильный выбор температуры приводит либо к связыванию в неверном месте, появлению неспецифических продуктов (если занижена температура). Или к плохому связыванию праймеров с матрицей (если завышена температура). Рекомендуется подбирать праймер с температурой плавления более 60 °C , проводить отжиг и элонгацию одновременно, при температуре 60-72 °C.
- Синтез новой цепи ДНК. ДНК-полимераза реплицирует цепь, используя в качестве затравки праймер. Эта стадия еще называется — элонгации. Эта стадия длится примерно 7—10 мин.
Неоспоримые преимущества ПЦР:
- Метод позволяет выделить искомый объект, причем, исключая лабораторные ошибки.
- Очень высокая чувствительность. Благодаря этому для исследования хватит даже микроскопического количества биосреды.
- Универсальный метод, так как подходит для выявления бактерий, вирусов, грибов и других возбудителей.
- Конкретность, так как ПЦР дает доказательства наличия в организме того или иного возбудителя.
- Лояльность, так как отсутствуют жесткие требования для исследуемого материала. Для исследования подходит: кровь, слизь, волосы, слюна, при чем в очень маленьких количествах.
Полимеразная цепная реакция – это самый современный, быстрый, точный метод исследования для выявления множества заболеваний. ПЦР обнаруживает инфекционных возбудителей даже в тех случаях, когда другим методам (бактериологическим, микроскопическим, иммунологическим) это не под силу. Более того, ПЦР позволяет обнаружить даже единичные клетки микроорганизмов (бактерий, вирусов). Справляется реакция, когда необходимо выявить возбудителя с высокой антигенной изменчивостью, также микроорганизмов, которые паразитируют внутри клеток, другими методами их обнаружить очень сложно.
Быстрота метода ПЦР определяется тем, что долго выделять, выращивать возбудителя не требуется, для того. Чтобы его найти. Данный процесс автоматизирован и стандартизирован вплоть до подготовки пробы для вывода нуклеиновой кислоты из вирусов и бактерий. Это сводит к минимуму возможность ошибки, которые связаны с подготовкой и тестированием пробы. Результаты могут быть получены всего за пару часов.
ПЦР – это универсальная диагностика, так как позволяет обнаружить чужеродное ДНК в различных биологических тканях. При данном виде исследования будут определены абсолютно все возбудители, ДНК которых содержится в исследуемом материале.